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氢盐水对重症性胰腺炎肺损伤保护及机制研究

来源:  |  发布时间:2015/8/8 9:33:54  |  浏览次数:

  泸州医学院研究生论文
   急性胰腺炎是外科常见的一种急腹症。临床上通常分为轻症与重症急性胰腺炎。重症急性胰腺炎是临床上病情凶险起病急、发展快、并发症较多、预后差、病死率高的临床危重疾病,早期就容易诱发全身炎症反应综合征、并发多脏器功能衰竭。急性胰腺炎相关性肺损伤(APALI)是急性胰腺炎最早出现、最常见、也是最为严重的并发症之一。APALI是指急性胰腺炎时炎症介质、细胞因子大量释放经血循环等途径到达肺组织, 导致肺内大量炎症细胞浸润、细胞信号通路过度激活,引起炎性介质级联放大反应,从而出现顽固性低氧血症,进而可能发展成为急性呼吸窘迫综合征是急性胰腺炎早期主要死亡原因。
   丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一种能够双重磷酸化丝氨酸和苏氨酸的蛋白激酶,是介导细胞内外信号转导的重要通路,在真核细胞的细胞胞浆中普遍分布。c.Jun是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 的主要成员之一,因其与机体应激反应密切相关故也被称为应激激活蛋白激酶(SAPK),在许多应激刺激因素如细胞炎症因子、生长因子、热休克、活性氧(ROS)、细胞表面受体等刺激下激活且活性增强。有实验表明在急性胰腺炎早期,肺组织中心MAPK信号通路已被激活,从而使活化蛋白-1(AP-1)激活, 活化的AP-1可使IL-1、TNF表达上调,在APALI中起重要作用。同时,目前有实验研究证实在急性胰腺炎发病的早期氧化应激已发生,大量的氧自由基通过影响细胞内外信号转导通路,在胰腺损伤及伴随的局部或全身并发症中起着至关重要的作用。因此,抗氧化治疗可能是减轻急性胰腺炎病情发展治疗APALI的重要手段。
   然而,理想的选择性抗氧化剂并不容易寻找。2007年日本学者 0hsawa等发现氢气具有选择性抗氧化作用,可以选择性中和毒性作用强的羟自由基和亚硝酸阴离子,而后两者是氧化应激的重要介质。这一研究结果迅速引起众多学者的广泛关注,从而掀起了氢分子医学的研究热潮。现已证实氢气对肝、肾、心肌、脑、小肠等器官的缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。新近有研究表明静脉注射氢生理盐水对L-精氨酸诱发的急性胰腺炎具有治疗作用,但具体机制尚有待进一步明确。本实验研究拟在建立大鼠急性胰腺炎模型的基础上,探讨静脉注射氢饱和生理盐水是否对急性胰腺炎及其肺损伤具有保护作用,并拟从信号通路变化方面探讨其可能的作用机制,旨在为急性胰腺炎及其肺损伤的抗氧化应激治疗提供新方向。
   目的:探讨静脉注射氢饱和生理盐水对牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤是否具有保护作用并从卧取信号通路的调控探讨其作用机制。方法:1.氢饱和生理盐水的制备:利用氢气发生器生产高压氢气,再将高压氢气通入氯化钠溶液中达到饱和浓度即可现制现用。2.大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型的建立及处理: 将54只健康SD雄性大鼠随机分成假手术组(Sham组)、模型组(SAP+NS组)和氢水处理组(SAP+H2组),各组再分成6h、12h、24h 三个时间点,每个时间点6只大鼠。Sham组大鼠开腹翻动胰腺数次后随即关腹,不作其他处理,SAP+NS组和SAP+H2组以5%牛磺胆酸钠经胆胰管开口逆行注入建立模型,在建模成功后lh经尾静脉分别注射等量的生理盐水或氢饱和生理盐水 (5m1/kg)。各组分别在6h、12h、24h三个时间点处死大鼠,收集血清、肺组织及胰腺组织。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清 IL.1含量;分光光度计法测定肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性;荧光定量PCR法检测肺组织中IL-1和TNF的mRNA的表达,Wbstem blot法检测肺组织中信号分子蛋白的表达,用肺组织湿干重比,反映肺脏水肿程度;并对胰腺组织、肺组织进行HE染色病理学检查。结果发现,(1)SAP+NS组和SAP+H2组血清中细胞因子含量、肺组织中TNF mRNA表达水平、肺组织中蛋白表达、肺组织湿干重比,在 6h、12h、24h各个时间点均高于对照组(P<0.05),SAP+H2组与SAP+NS组比较,SAP+H2组在各个时间点均低SAP+H2组。各种检测结果表明,氢气治疗能对抗组织炎症反应和减少组织病理改变。研究结果表明,1.经尾静脉注射氢饱和生理盐水对APALI有一定治疗保护作用。2.氢饱和生理盐水可能是通过其选择性抗氧化作用抑制细胞信号通路激活来实现对 APALI的保护治疗作用。

 

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